猪胸膜肺炎放线杆菌、肺炎支原体和多杀性巴氏杆菌联合检测芯片的研制及应用

？本研究旨在建立联合检测胸膜肺炎放线杆菌、猪肺炎支原体和多杀性巴氏杆菌的dna芯片。用7个从3种病菌基因组中扩增出的不同特异性靶dna制作基因芯片，并对芯片的靶dna和探针浓度、杂交温度、重复性、特异性和灵敏度进行了研究。结果表明，检测芯片的特异性强，能与测试的李氏放线杆菌、猪鼻支原体和副猪嗜血杆菌等9种病原区分；灵敏度高，在50μl标记反应体系中，能检测到10~50pg基组dna，芯片可重复利用。用芯片对44株目标菌的不同型标准菌株、分离株和疫苗株进行了检测，其信号值≥1000，信号噪音比（snr）≥6。用芯片对45头病猪和97头健康猪的临床样品选择培养物进行了检测，其检出率分别为多杀性巴氏杆菌71.1%和49.5%、胸膜肺炎放线杆菌42.2%和26.8%、猪肺炎支原体20%和22.7%，混合感染率分别为42.2%和24.7%。在检测临床样品时，芯片法与pcr的符合率为97.8%~100%，与分离鉴定法的符合率为87.6%~95.6%。研究表明，研制的芯片特异性强、敏感性高、可重复使用，是一种能有效用于胸膜肺炎放线杆菌、猪多杀性巴氏杆菌和猪肺炎支原体鉴定和联合检测的新工具。