猪繁殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白翻译起始位点的研究

？猪繁殖与呼吸综合征病毒（porcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus，prrsv）核衣壳蛋白（nucleocapsidprotein，n蛋白）的表达是通过非连续性转录合成的亚基因组（subgenomic，sg）mrna翻译而来。但位于亚基因组前导序列中的2个aug均不能作为n蛋白翻译的起始位点，其翻译使用的是n开放阅读框（orf）中的首个aug，因此，本研究旨在感染性克隆的基础上研究n蛋白的翻译起始位点。作者实验室已有在orf6和orf7之间插入酶切位点的感染性克隆porf673，该突变克隆中含有3个潜在的aug，分别构建了porf673中n蛋白的其中2个潜在的起始密码子aug突变的全长克隆，转染marc-145细胞。这些突变体都能够拯救出子代病毒，其中2个突变病毒的n蛋白的前11个氨基酸完全改变，这些突变病毒都能够在marc-145细胞上稳定传代。经rt-pcr分析子代病毒的n基因序列及其亚基因组序列，结果表明n蛋白的翻译偏向于使用其orf的第1个潜在的aug。如果后者移码，则病毒可以自身修复，这是首次发现病毒有矫正orf的功能。本研究为n蛋白n端插入标签作为标记疫苗以及进一步研究n蛋白结构与功能奠定了基础。