多头带绦虫tm7基因的表达及间接elisa检测方法的建立

？以多头带绦虫tm7重组蛋白为抗原，建立动物多头蚴病早期诊断方法。本研究从羊脑多头蚴原头节提取总rna，采用rt-pcr技术首次扩增出tm7基因的全序列，该基因的开放阅读框为207bp，编码68个氨基酸。将此基因克隆到pet-32a(+)载体，构建重组表达质粒pet-32a-tm7，经转化大肠杆菌bl21（de3）后iptg诱导表达，用sds-page和westernblot检测表达产物。以纯化后的表达蛋白作为抗原，建立检测羊脑多头蚴病抗体的重组蛋白间接elisa方法。研究结果表明，tm7基因在大肠杆菌中成功表达，表达产物为约27ku的融合表达蛋白，该蛋白能识别羊脑多头蚴病阳性血清。建立的间接elisa方法，检测敏感性可达93.3%，特异性达94.1%，研究结果表明tm7重组蛋白可作为脑多头蚴病的诊断抗原。