绵羊黏膜趋化因子ccl28基因的克隆、序列分析与原核表达

？利用同源序列克隆原理设计1对克隆引物，从绵羊结肠黏膜组织提取mrna，通过rt-pcr获得ccl28基因，将pcr产物克隆、测序，并进行序列分析；再根据克隆的序列设计1对表达引物，用pcr法从重组克隆载体中扩增出含bamhⅰ/xhoⅰ酶切位点的ccl28片段，双酶切后亚克隆至pgex-4t-1载体，构建重组原核表达载体pgex-ccl28，转化宿主菌e.colibl21(de3)，经iptg诱导进行表达，sds-page鉴定。克隆的绵羊ccl28基因包含完整的开放阅读框，克隆片段长444bp，orf为387bp，编码129个氨基酸，与人、小鼠、猪、牛该基因的同源性分别为76.4％、61.4%、84.3%和92.9%，推测的氨基酸序列与人、小鼠、猪、牛的同源性分别为76％、63%、84%和93%，表达的融合蛋白分子量约为39ku，并以包涵体形式存在。为下一步研究绵羊ccl28的生物学功能奠定基础。