%0 Journal Article %T 绵羊黏膜趋化因子ccl28基因的克隆、序列分析与原核表达 %A 乔新安 %A 李宏基 %A 王月影 %A 朱彦彩 %A 韩立强 %A 杨国宇 %A 王艳玲 %J 牲畜兽医学报 %P 842-847 %D 2008 %X ?利用同源序列克隆原理设计1对克隆引物,从绵羊结肠黏膜组织提取mrna,通过rt-pcr获得ccl28基因,将pcr产物克隆、测序,并进行序列分析;再根据克隆的序列设计1对表达引物,用pcr法从重组克隆载体中扩增出含bamhⅰ/xhoⅰ酶切位点的ccl28片段,双酶切后亚克隆至pgex-4t-1载体,构建重组原核表达载体pgex-ccl28,转化宿主菌e.colibl21(de3),经iptg诱导进行表达,sds-page鉴定。克隆的绵羊ccl28基因包含完整的开放阅读框,克隆片段长444bp,orf为387bp,编码129个氨基酸,与人、小鼠、猪、牛该基因的同源性分别为76.4%、61.4%、84.3%和92.9%,推测的氨基酸序列与人、小鼠、猪、牛的同源性分别为76%、63%、84%和93%,表达的融合蛋白分子量约为39ku,并以包涵体形式存在。为下一步研究绵羊ccl28的生物学功能奠定基础。 %K 绵羊 %K 黏膜相关上皮趋化因子 %K 分子克隆 %K 序列分析 %K 原核表达 %U http://118.145.16.233/Jweb_xmsy/CN/abstract/abstract12183.shtml