弓形虫mic3基因真核表达质粒的构建及在ibrs-2细胞内的表达

？采用pcr技术从弓形虫rh株的基因组dna中扩增编码mic3的基因，克隆入pmd18t载体，转化至e.colidh5α感受态细胞，经抗性平板筛选、小量抽提质粒进行酶切、pcr及dna测序鉴定后，亚克隆入真核表达载体pcdna3.1。然后筛选含有目的基因的重组质粒，并转染ibrs-2细胞，在g418压力下进行筛选，利用sds-page、westernblot和elisa检测表达情况。结果显示，扩增的mic3基因与genbank上相应基因序列（aj132530）的一致性达99.9%，构建的真核表达质粒pcmic3能在转染的ibrs-2细胞中表达分子量约为39.2ku的mic3，且表达的蛋白质具有良好的免疫活性，为进一步研究该质粒的动物免疫试验奠定了基础。