小反刍兽疫病毒n基因重组杆状病毒的构建及间接elisa抗体检测方法的建立

？本研究旨在建立基于真核表达的小反刍兽疫病毒（pprv）n蛋白的诊断小反刍兽疫的间接elisa方法。利用bac-to-bac杆状病毒昆虫表达系统，构建含有pprvn基因的重组供体质粒pfastbachta-n，转化e.colidh10bac感受态细胞，得到重组穿梭质粒pbacmidpprv-v，转染昆虫细胞sf21，获得含有pprvn基因的重组杆状病毒。用重组病毒感染昆虫细胞后，sds-page鉴定出60ku左右的表达蛋白，westernblot检测该蛋白具有很好的反应原性。以重组bacmidpprv-n蛋白作为包被抗原，建立间接elisa检测方法。临床检测来自西藏疫区的37份山羊血清和来自青海省非疫区的92份山羊血清，与法国蒙彼利埃农学发展研究国际合作中心（cirademvt）提供的竞争elisa试剂盒相比较，特异性为96.2%，敏感性为100%，二者的符合率达到96.9%。结果表明本研究建立的间接elisa方法可以很好地用于小反刍兽疫的临床诊断。