猪支气管败血波氏杆菌菌毛fimd基因的克隆表达及间接elisa检测方法的建立

？参照genbank上支气管败血波氏杆菌的菌毛fimd基因序列（x75811），设计1对引物，从本实验室分离鉴定的猪源支气管败血波氏杆菌中扩增出fimd编码区1098bp的片段，将其克隆至原核表达载体pet-28a，转化到大肠杆菌bl21（de3）中进行融合表达。sds-page和westernblot检测证实该表达产物以包涵体形式存在，大小约42ku，与用支气管败血波氏杆菌菌体制备的阳性血清能发生特异性反应。将包涵体变性和复性后包被酶标板建立间接elisa（fimd-elisa），特异性良好。用fimd-elisa检测临床送检的668份血清，阳性率为30.7%。用该法与微量凝集试验平行检测102份血清，fimd-elisa的敏感性高于微量凝集试验。