talens编辑绵羊成纤维细胞fgf5基因

？类转录激活因子效应物（transcriptionactivator-likeeffector，tale）已经成为基因组编辑和基因转录调控的有效工具，在多个物种的基因组中实现特定位点的删除、插入和突变。针对绵羊成纤维细胞生长因子5（fibroblastgrowthfactor5，fgf5）基因起始密码子atg位点，设计构建talens（transcriptionactivator-likeeffectornucleases，talens）。通过比较分析正常培养和基因组编辑处理的绵羊成纤维细胞，电转talens组合，surveyor突变检测，筛选获得1对有效的talens。有限稀释细胞传代培养，pcr扩增fgf5基因片段，经page检测筛选发生突变的细胞，测序确认fgf5基因atg位点产生缺失突变细胞。获得具有编辑活性的talens，为该基因的定点编辑奠定基础。surveyor检测和测序结果表明，在绵羊fgf5基因atg起始密码子上游104碱基位点，存在1个g/c单核苷酸多态。