转内切葡聚糖酶基因罗伊乳酸杆菌的构建及其肉鸡饲喂效果验证

？本研究旨在构建可胞外分泌内切葡聚糖酶，且具有降解β-葡聚糖能力的转内切葡聚糖酶基因罗伊乳酸杆菌，并对其进行肉鸡饲喂效果验证，为后续转基因乳酸杆菌在动物生产中的应用奠定基础。采用pcr和酶切连接方法构建plem4157（cel）载体，转化lactobacillus.reuterixc1感受态细胞，进行聚丙烯胺凝胶电泳表达谱分析和内切葡聚糖酶活性测定，同时测定其肉鸡饲喂效果。结果表明，克隆的内切葡聚糖酶基因大小为1500bp，经测序比对，与已报道基因序列相似性为99%，氨基酸序列相似性为100%；native-page和sds-page分析结果表明，内切葡聚糖酶基因celw成熟肽在罗伊乳酸杆菌的蛋白分子量均为52ku左右，与理论计算值相符；l.reuteriplem4157（cel）培养上清和胞内上清内切葡聚糖酶活性分别为（0.96±0.08）和（0.37±0.09）u？ml-1；l.reuteriplem4157（cel）对肉仔鸡生长性能无显著影响，但可显著降低21日龄肉仔鸡十二指肠、空肠ph，促进21日龄肉仔鸡肾、法氏囊、胸腺和胰腺的生长发育，增加42日龄肉仔鸡的胸腺和胰腺指数，提高肉仔鸡21日龄血清白球比、钙、磷含量和42日龄血清葡萄糖含量。l.reuteriplem4157（cel）成功分泌表达了内切葡聚糖酶，具有降解羧甲基纤维素的能力和一定的肉鸡饲喂效果。