绵羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白单克隆抗体的制备及双抗体夹心elisa方法的初步建立

？为制备抗绵羊肺腺瘤病毒（jsrv）囊膜蛋白（env）胞质尾区（ct）的单克隆抗体，利用生物信息学分析jsrv囊膜蛋白氨基酸序列，根据分析结果合成多肽，将此多肽分别连接钥孔血蓝蛋白（ct-klh）和牛血清白蛋白（ct-bsa），用ct-klh作为抗原免疫balb/c小鼠，取免疫小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞融合。建立间接elisa方法筛选分泌抗ct蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞，获得1株能稳定分泌抗ct蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株，命名为8e5，亚类为igg2a/κ。间接elisa检测培养上清效价为6.4×103，腹水效价为1×105。westernblot及免疫组化结果显示，这株杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体能识别jsrv抗原，与其发生特异性反应。试验结果证明，单抗8e5是绵羊肺腺瘤的重要诊断试剂。应用8e5细胞株分泌的单克隆抗体建立jsrv-env的双抗体夹心elisa检测方法，该elisa检测方法特异性、重复性和敏感性良好，为快速检测诊断绵羊肺腺瘤和研究囊膜蛋白功能奠定了基础。