犬瘟热病毒囊膜糖蛋白在杆状病毒-昆虫细胞系统中的表达及鉴定

？为表达具有天然构象的犬瘟热病毒（cdv）囊膜糖蛋白融合蛋白（f）和血凝素蛋白（h），本研究扩增小熊猫源cdv驯化致弱株lp的f、h基因，克隆至pfastbactm1载体中，测序验证后转化至dh10bactm感受态细胞，同源重组获得穿梭质粒rbacmid-f、rbacmid-h，将其分别转染sf9细胞获得重组杆状病毒rpfb-f、rpfb-h，并将表达的重组融合蛋白（rf）和血凝素蛋白（rh）进行ifa和westernblot鉴定。以犬抗cdv高免血清对重组杆状病毒感染细胞进行ifa鉴定，在感染细胞的细胞膜上可见特异性荧光反应；以鼠抗f、h蛋白的主要抗原表位区多克隆抗体对重组杆状病毒感染细胞进行westernblot检测，可见相对分子质量为63和68ku左右的条带，分别为重组融合蛋白（rf）和血凝素蛋白（rh），大小与预期相符。两种囊膜糖蛋白在杆状病毒-昆虫细胞系统中均成功表达，且具有良好的反应原性。本研究为cdv病毒样颗粒疫苗的开发等工作奠定了基础。