MARCH1真核表达载体的构建及鉴定

[摘要]　目的　构建MARCH1真核表达载体并进行鉴定和纯化，为研究MARCH1在小鼠树突细胞(DCs)中的生物学作用奠定基础。方法　从小鼠尾部提取cDNA作为模板，采用特异的引物，通过聚合酶链反应(PCR)扩增MARCH1cDNA片段，经EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切，连接于载体pMB-HA质粒上，构建重组载体，经双酶切和DNA测序分析检测重组载体构建结果，转化大肠埃希菌DH5α感受态菌、筛选阳性克隆、抽提质粒并进行纯化。结果　PCR获得与预期大小一致(约3900bp)的cDNA片段，成功构建重组载体pMB-HA-MARCH1，双酶切及测序鉴定证实MARCH1cDNA片段正确插入该真核表达载体中。结论　成功构建含有MARCH1的真核表达载体，为进一步研究提供了实验基础。