慢性乙肝患者石蜡包埋肝组织中HBVcccDNA定量检测方法的建立

目的？建立慢性乙肝患者微量石蜡包埋肝组织共价闭合环状DNA（HBVcccDNA）定量检测方法。方法？？以37例慢性？乙肝患者甲醛固定石蜡包埋肝组织为研究对象，提取肝组织HBVDNA，经不降解质粒的ATP依赖的DNA酶（PSAD）消化后，利用？滚环扩增加跨缺口实时荧光PCR扩增技术检测肝组织中HBVcccDNA含量，以β-actin为内参照。通过已知浓度的模板DNA进行？梯度稀释鉴定该方法的灵敏度，并对该方法进行批内和批间重复性检测。应用该方法分析37例慢性乙肝患者肝组织HBVcccDNA？与血清总HBVDNA、肝组织总HBVDNA的关系，以及肝组织HBVcccDNA和HBVDNA与血清HBeAg表达之间的关系。结果？？？？成功建立了微量石蜡包埋肝组织HBVcccDNA的定量检测方法，该方法具有较好的特异性、灵敏度和稳定性。HBeAg阳性者肝组织？中cccDNA含量明显高于HBeAg阴性者，HBVcccDNA水平与血清总HBVDNA水平（R？？？2？？=0.48，P=0.042）及肝组织总HBVDNA？水平（R？？？2？？=0.63，P=0.001）呈正相关。结论？？该方法可特异灵敏地定量检测微量石蜡包埋组织切片中的HBVcccDNA。