急性乙肝患者HBV特异性CD8T细胞受体基因的克隆分析

目的？探讨急性乙肝患者HBV特异性CD8T细胞受体（TCR）参与免疫应答的分子机制。方法？？分离HLA-A2阳性？急性乙型肝炎患者外周血单个核细胞（PBMCs），用荧光标记的CD3、CD8抗体和五聚体染色，流式细胞仪检测HBsAg183-191和HB-？sAg335-343特异性CD8T细胞频率。取6例患者PBMCs，用HBsAg335-343表位多肽诱导培养3～4周，用磁珠分选出CD8T细胞？后再用流式细胞术分选HBV特异性CD8T细胞，经IL-2/CD3抗体/CD28抗体扩增后提取细胞mRNA，用cDNA5′末端快速扩增技？术获取TCR分子α链和β链全长可变区基因片段并进行克隆和测序，每个样本的克隆测序数≥50个。确定TCRα、β链基因家族并？比较CDR3区序列特点。结果？？6例患者样本600多个TCRα、β链克隆基因序列分析结果表明，HBV特异性CD8T细胞均呈现？TCR分子α、β链基因家族优势表达特点，每例患者样本以2～4种α链和1～4种β链家族为主，其中α2、α14、α15、β3、β13和23链家族？同时出现在1例以上患者，有1例患者所有克隆分析的β链基因均为β13家族。同一患者同一家族α、β链CDR3区序列趋于一致，而？不同患者同一家族α、β链CDR3区序列相差较大。结论？？经HBV抗原表位多肽诱导增殖的特异性CD8T细胞具有明显的TCRα、β？链取用优势特点，这种TCR链的优势表达特点可能是影响抗HBV感染特异性细胞免疫力的重要分子基础。