酵母双杂交技术筛选与乙型脑炎病毒NS5相互作用的蛋白

［摘要］目的？应用酵母双杂交技术筛选与乙型脑炎病毒NS5蛋白相互作用的宿主蛋白。方法？？构建表达乙型脑炎病毒NS5？蛋白的诱饵质粒pSos-NS5，经自激活和毒性实验后对人脐静脉内皮细胞cDNA文库进行筛选，挑取37℃条件下在缺失亮氨酸和尿嘧？啶培养基上生长的克隆，利用一对一酵母回复性杂交实验进行验证，然后测定阳性克隆插入片段序列，通过Blast分析确定可能与？NS5相互作用的蛋白。结果？？构建的诱饵载体pSos-NS5对酵母宿主无毒性，且无自激活活性。经过筛选得到3个阳性克隆（10，11，？4′6号克隆），经测序和Blast分析，初步确定4′6号克隆编码的TC21蛋白可能与NS5发生相互作用。结论？？经酵母双杂交技术筛选？到一种可能与NS5蛋白具有相互作用的人类蛋白，为深入探讨乙型脑炎病毒NS5蛋白的生物学功能奠定了基础。