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ISSN: 2333-9721
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1.1倍长乙型肝炎病毒基因组在Huh7细胞中的高效复制和表达

, PP. 635-638

Keywords: 肝炎病毒,乙型,基因组,病毒复制,基因表达

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Abstract:

?目的?构建乙型肝炎病毒(HBV)1.1倍基因组长度的重组载体,研究其在人肝癌细胞系Huh7中的复制与表达。方法????以慢性乙型肝炎患者C基因型HBVDNA为模板,用聚合酶链反应(PCR)扩增出HBV基因组的两条DNA片段,酶切后与载体连?接成含HBV1.1倍基因组长度的重组载体。经PCR、酶切及测序鉴定后,将重组载体经FuGENE????HD转染入Huh7细胞,用ELISA?检测转染细胞培养上清液的HBsAg和HBeAg表达,用荧光定量PCR和Southern杂交检测HBVDNA的复制水平及复制中间体。??结果??经鉴定证实成功构建1.1倍基因组长度C基因型HBV重组载体,体外转染Huh7细胞48h后,培养上清液中检出HBsAg和?HBeAg表达;转染72h后,荧光定量PCR检出较高的HBVDNA复制水平(10???7??~10???9??拷贝/ml);Southern杂交检出病毒复制中间体。??结论??构建的1.1倍长重组载体可以介导高水平的HBV病毒复制和基因表达,为进一步体外瞬时转染HBV表型耐药分析奠定基础。

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