%0 Journal Article
%T 1.1倍长乙型肝炎病毒基因组在Huh7细胞中的高效复制和表达
%A 蒋林彬
%A 施建飞
%A 刘妍
%A 刘文
%A 思兰兰
%A 钟彦伟
%A 徐东平
%J 解放军医学杂志
%P 635-638
%D 2010
%X ？目的？构建乙型肝炎病毒（HBV）1.1倍基因组长度的重组载体，研究其在人肝癌细胞系Huh7中的复制与表达。方法？？？？以慢性乙型肝炎患者C基因型HBVDNA为模板，用聚合酶链反应（PCR）扩增出HBV基因组的两条DNA片段，酶切后与载体连？接成含HBV1.1倍基因组长度的重组载体。经PCR、酶切及测序鉴定后，将重组载体经FuGENE？？？？HD转染入Huh7细胞，用ELISA？检测转染细胞培养上清液的HBsAg和HBeAg表达，用荧光定量PCR和Southern杂交检测HBVDNA的复制水平及复制中间体。？？结果？？经鉴定证实成功构建1.1倍基因组长度C基因型HBV重组载体，体外转染Huh7细胞48h后，培养上清液中检出HBsAg和？HBeAg表达;转染72h后，荧光定量PCR检出较高的HBVDNA复制水平（10？？？7？？～10？？？9？？拷贝/ml）;Southern杂交检出病毒复制中间体。？？结论？？构建的1.1倍长重组载体可以介导高水平的HBV病毒复制和基因表达，为进一步体外瞬时转染HBV表型耐药分析奠定基础。
%K 肝炎病毒
%K 乙型
%K 基因组
%K 病毒复制
%K 基因表达
%U http://www.jfjyxzz.org.cn/Magazine/Show.aspx?ID=22016