新城疫病毒Italien株辅助质粒的构建及功能鉴定

[摘要]　目的　构建基于T7启动子的含新城疫病毒(NDV)Italien株核衣壳蛋白(NP)、磷酸化蛋白(P)和蛋白(L)基因的表达质粒，作为构建重组NDV所需的辅助质粒。方法　将NDV的NP、P和L基因酶切后置于T7启动子和核糖体进入位点序列的下游，分别构建NP、P和L基因的表达质粒，转染BSR-T7/5细胞，采用间接免疫荧光法(IFA)检测病毒蛋白的表达，利用微型基因组(MG-L)质粒检测辅助质粒组装核糖核酸蛋白质复合物(RNP)的功能。结果　测序证实辅助质粒构建正确。IFA检测可观察到NP和P基因的表达。与MG-L单转染对照组和空白对照组相比，辅助质粒和MG-L共转染后，报告基因萤火虫荧光素酶得到高效表达(P<0.001)。结论　成功构建了基于T7启动子的NDV辅助质粒，为进一步构建重组溶瘤NDVItalien株奠定了基础。