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ISSN: 2333-9721
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人乙醛脱氢酶2的原核表达及其活性的鉴定

DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2014.12.034, PP. 201-206

Keywords: 乙醛脱氢酶2,克隆,条件优化,酶活鉴定

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Abstract:

商品化的乙醛脱氢酶主要从动物细胞、肝细胞线粒体中提取,其来源受到很大的限制,而且价格昂贵。为了解决乙醛脱氢酶原料有限的问题,利用微生物发酵法获取乙醛脱氢酶。将人乙醛脱氢酶2基因(aldh2)克隆至原核表达载体pET32a中,构建重组载体pET32a-ALDH2。将构建的重组载体转化大肠杆菌E.coliBL21(DE3),用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)进行诱导,SDS-PAGE电泳结果显示目的蛋白得到大量表达;且对诱导表达条件进行优化。结果显示,在37℃,1.0mmol/LIPTG诱导表达6h为最优表达条件。由于目的蛋白几乎都是以包涵体形式表达,为了得到有活性的乙醛脱氢酶,对包涵体变性、复性和纯化进行了研究。试验数据显示,酶的最终得率为14.49U/L。并通过用Bradford法,测定复性蛋白的浓度约为77μg/mL,进行活性检测表明,该复性蛋白具有乙醛脱氢酶活性,酶活性约为1.449U/mL。通过构建重组载体pET32a-ALDH2和优化表达条件,aldh2在原核表达宿主E.coliBL21(DE3)得到大量表达;此外,利用透析复性法得到的复性蛋白酶活性有所提高。

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