%0 Journal Article
%T 人乙醛脱氢酶2的原核表达及其活性的鉴定
%A 黄娟
%A 王荷花
%A 张小骥
%A 潘博宇
%A 陈孝平
%A 吴元欣
%J 生物技术通报
%P 201-206
%D 2014
%R 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2014.12.034
%X 商品化的乙醛脱氢酶主要从动物细胞、肝细胞线粒体中提取，其来源受到很大的限制，而且价格昂贵。为了解决乙醛脱氢酶原料有限的问题，利用微生物发酵法获取乙醛脱氢酶。将人乙醛脱氢酶2基因(aldh2)克隆至原核表达载体pET32a中，构建重组载体pET32a-ALDH2。将构建的重组载体转化大肠杆菌E.coliBL21(DE3)，用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)进行诱导，SDS-PAGE电泳结果显示目的蛋白得到大量表达；且对诱导表达条件进行优化。结果显示，在37℃，1.0mmol/LIPTG诱导表达6h为最优表达条件。由于目的蛋白几乎都是以包涵体形式表达，为了得到有活性的乙醛脱氢酶，对包涵体变性、复性和纯化进行了研究。试验数据显示，酶的最终得率为14.49U/L。并通过用Bradford法，测定复性蛋白的浓度约为77μg/mL，进行活性检测表明，该复性蛋白具有乙醛脱氢酶活性，酶活性约为1.449U/mL。通过构建重组载体pET32a-ALDH2和优化表达条件，aldh2在原核表达宿主E.coliBL21(DE3)得到大量表达；此外，利用透析复性法得到的复性蛋白酶活性有所提高。
%K 乙醛脱氢酶2
%K 克隆
%K 条件优化
%K 酶活鉴定
%U http://biotech.caas.cn/CN/abstract/abstract10501.shtml