全部 标题 作者
关键词 摘要

OALib Journal期刊
ISSN: 2333-9721
费用：99美元
投递稿件

查看量下载量

相关文章

更多...

鸡胚胎干细胞多能性相关基因cNanog和cPouV干扰载体的构建及筛选

, PP. 117-121

Keywords: 鸡,胚胎干细胞,cNanog,cPouV,干扰载体

Full-Text   Cite this paper   Add to My Lib

Abstract:

旨在构建靶向鸡胚胎干细胞多能性相关基因cNanog和cPouV的siRNA表达载体，并在体外检测其对cNanog和cPouV表达的抑制作用。分别选择cNanog和cPouV中3个区域合成寡聚核苷酸构建siRNA表达载体，同时构建cNanog和cPouV全基因表达载体来检测基因表达下调的效果。经Westernblotting检测显示，所构建的siRNA表达载体可在293T细胞内表达siRNA或shRNA，诱发RNA干扰效应，从而抑制目的基因cNanog和cPouV的表达。不同位点的寡核苷酸序列抑制效率不同，其中pS3-cNanog和pS3-cPouV重组质粒的干扰效果和抑制效率最好。研究结果为后续得到稳定干扰cNanog和cPouV基因的重组载体和进一步研究cNanog和cPouV基因功能奠定了基础。

 References

[1]  Mitsui K, Tokuzawa Y, Itoh H, et al. The homeoprotein Nanog is required for maintenance of pluripotency in mouse epiblast and ES cells[J]. Cell, 2003, 113(5)：631-642.
[2]  Pan G, Thomson JA. Nanog and transcriptional networks in embryonic stem cell pluripotency[J]. Cell Res, 2007, 17(1)：42-49.
[3]  Lavial F, Pain B. Chicken embryonic stem cells as a non-mammalian embryonic stem cell model[J]. Dev Growth Differ, 2010, 52(1)：101-114.
[4]  陈志胜, 刘本杰, 王丙云, 等. 全能性相关基因在早期鸡胚发育过程中的表达[C]. 南京：中国畜牧兽医学会动物生理生化学分会, 2012.
[5]  Bosher JM, Labouesse M. RNA interference：genetic wand and genetic watchdog[J]. Nat Cell Biol, 2000, 2(2)：E31-E36.
[6]  Tabara H, Grishok A, Mello CC. RNAi in C. elegans：soaking in the genome sequence[J]. Science, 1998, 282(5388)：430-431.
[7]  张曼玉, 陈志胜, 计慧琴, 等. 鸡胚胎干细胞分离方法和培养体系的优化[J]. 中国组织工程研究与临床康复, 2011(45)：8429-8433.
[8]  庄淑珍, 窦忠英, 杨炜峰, 等. ES-D3细胞nanog基因干扰载体的构建及其干涉效果[J]. 农业生物技术学报, 2005(6)：754-758.
[9]  Rodda DJ, Chew JL, Lim LH, et al. Transcriptional regulation of nanog by OCT4 and SOX2[J]. J Biol Chem, 2005, 280(26)：24731-24737.
[10]  Soodeen-Karamath S, Gibbins AM. Apparent absence of oct 3/4 from the chicken genome[J]. Mol Reprod Dev, 2001, 58(2)：137-148.
[11]  刘本杰, 陈志胜, 陈胜锋, 等. 全能性相关基因cNanog、cPouV和Sox2在鸡早期胚胎中的表达[J]. 中国组织工程研究, 2012(41)：7733-7736.
[12]  王丙云, 陈胜锋, 刘本杰, 等. 全能性相关基因在鸡胚胎干细胞中分化过程中的表达[C]. 南京：中国畜牧兽医学会动物生理生化学分会, 2012.
[13]  Fire A, Xu S, Montgomery M K, et al. Potent and specific genetic interference by double-stranded RNA in Caenorhabditis elegans[J]. Nature, 1998, 391(6669)：806-811.
[14]  Sharp PA. RNA interference--2001[J]. Genes Dev, 2001, 15(5)：485-490.
[15]  Chang HS, Lin CH, Chen YC, et al. Using siRNA technique to gen-erate transgenic animals with spatiotemporal and conditional gene knockdown[J]. Am J Pathol, 2004, 165(5)：1535-1541.
[16]  Brummelkamp TR, Bernards R, Agami R. A system for stable expression of short interfering RNAs in mammalian cells[J]. Science, 2002, 296(5567)：550-553.

Full-Text

Contact Us

service@oalib.com

QQ:3279437679

WhatsApp +8615387084133