Tgf2转座子多克隆位点的克隆与表达

以金鱼pTgf2-EF1α-EGFP转座子为基础，构建含有多克隆位点（Multiplecloningsites，MCS）序列以及外源目的基因肌醇-3-磷酸合成酶（Myo-inositol-3-phosphatesynthase，MIPS）的重组表达载体并注射到斑马鱼1-2期受精卵，检测重组表达载体pTgf2-EF1α-MCS-EGFP和pTgf2-EF1α-MCS-MIPS-EGFP在斑马鱼中绿色荧光蛋白基因（EGFP）的表达情况以及外源基因MIPS在斑马鱼体内的整合情况。荧光观察结果显示，两个重组载体均不影响EGFP的表达，只是表达强度存在一定差异，表明对Tgf2转座子的改造是有效的。转基因斑马鱼PCR检测结果显示，靶基因MIPS的编码区能够完整地整合到斑马鱼基因组中，整合效率达31.4%。重组表达载体的成功构建显示金鱼Tgf2转座子可以介导外源基因在斑马鱼中的表达，为以后Tgf2转座子在鱼类基因功能研究方面奠定了基础。