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重组人纤溶酶原激活剂转基因兔的制备及其表达产物的检测
DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2015.10.033
Keywords: 转基因兔 ,人组织纤溶酶原激活剂（ht-PA） ,乳腺特异性表达
Abstract:
人组织纤溶酶原激活剂（ht-PA）是临床血栓疾病治疗的主要生物药品,应用转基因动物乳腺生物反应器制备已有报道,但重组人纤溶酶原激活剂（rhPA）在转基因动物中表达尚未见报道。设计了以人t-PA的F、E、K1区位点缺失体为编码序列,以山羊β-酪蛋白/CMV杂合启动/增强子,构建了乳腺特异性表达载体PCL25/rhPA,通过受精卵原核显微注射法制备转基因兔。用PCR检测及其产物测序筛选转基因兔,ELISA试剂盒及纤维蛋白平板溶圈法检测转基因兔的表达产物。实验获得原代转基因兔5只（2♂,3♀）,其中2只乳腺中表达人重组纤溶酶原激活剂,rhPA浓度最高可达400μg/mL,表达产物比活性是现有阿替普酶的150-200倍。实验结果表明,重组人纤溶酶原激活剂（rhPA）可以在山羊β-酪蛋白/CMV杂合启动/增强子调控下获得乳腺特异性表达,表达重组蛋白具有较高的溶栓活性。
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