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ISSN: 2333-9721
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薯蓣褪绿坏死花叶病毒CP基因的原核表达及抗血清的制备

DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2015.08.030, PP. 206-212

Keywords: 薯蓣褪绿坏死花叶病毒,外壳蛋白,原核表达,抗血清

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Abstract:

薯蓣褪绿坏死花叶病毒(yamchloroticnecroticmosaicvirus,YCNMV)是马铃薯Y病毒科柘橙病毒属暂定成员。采用RT-PCR方法,以Sprimer/M4简并引物对扩增获得的YCNMV分离物3'端基因组序列为参考序列,根据该序列设计CP基因特异引物获得YCNMVCP基因并插入pET-30a表达载体中,在BL21(DE3)菌株中诱导表达。获得的融合蛋白经Ni+-NTA柱纯化后免疫新西兰大白兔,制备抗血清。结果表明,连接在表达载体中的CP基因序列及表达的蛋白氨基酸序列与预期的CP基因核苷酸和氨基酸序列同源性均为99.65%。聚丙烯酰胺凝胶电泳结果表明,获得的融合蛋白大小约为44kD,与预期蛋白大小相符。制备的抗血清经Westernblotting和ID-ELISA检测表明,获得的多克隆抗体效价较高,能可靠、灵敏、特异地与YCNMV病毒颗粒结合,可应用到该病毒的检测中。

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