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OALib Journal期刊
ISSN: 2333-9721
费用：99美元
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黔产宽叶缬草ISSR反应体系的建立与优化
DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2015.07.011, PP. 69-75
Keywords: 宽叶缬草,ISSR,单因素试验,正交设计,体系优化
Abstract:
旨在建立稳定、可靠的宽叶缬草ISSR反应体系。以10个水平单因素试验为基础，应用L16(45)正交设计对反应体系中4个主要因子在4个水平上进行组合优化，并采用直观法、极差法和方差法对试验结果进行分析；利用优化的反应体系，筛选引物以及最佳退火温度；同时，以9份不同产地宽叶缬草样品对反应体系进行稳定性检测。结果显示，宽叶缬草25μLISSR最佳反应体系为：2.5μL10×TaqBuffer，2.0mmol/LMg2+，0.28mmol/LdNTPs，0.3μmol/L引物，1.75UTaqDNA聚合酶，60ngDNA模板，ddH2O补齐；影响大小依次是：Mg2+>引物>dNTPs>TaqDNA聚合酶；确定了各引物的最佳退火温度以及筛选出扩增条带清晰稳定的17条ISSR引物；稳定性实验表明，该体系稳定可靠。优化出宽叶缬草ISSR最佳反应体系并筛选出理想的引物。
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