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ISSN: 2333-9721
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粉红黏帚霉糖化酶基因的克隆、表达及酶学性质分析

DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2015.07.029, PP. 193-200

Keywords: 糖化酶,粉红黏帚霉,黑曲霉G1,分泌表达

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Abstract:

用黑曲霉(Aspergillusniger)G1为宿主菌表达粉红黏帚霉(Gliocladiumroseum)糖化酶。运用PCR技术从粉红粘帚霉中扩增得到一个疑似糖化酶基因序列(约1.8kb),并将其连接到载体pGm上组建成重组质粒pGm-3440。将重组质粒转化到黑曲霉G1菌株中,经amdS筛选及PCR验证获得表达糖化酶的黑曲霉重组工程菌。重组菌的发酵结果显示,糖化酶基因在黑曲霉中得到了分泌表达,用国标法(QB/T1803-1993)测得重组糖化酶活性达292U/mL。进一步对其酶学性质进行分析发现,该重组酶最适温度和pH分别为50℃和5.0,该酶的耐热性较差,pH稳定性较好。

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