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拟穴青蟹抗菌肽hyastatin基因原核表达条件的优化
DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2015.07.020
Keywords: 拟穴青蟹 ,hyastatin基因 ,原核表达 ,条件优化
Abstract:
旨在优化拟穴青蟹抗菌肽hyastatin基因原核表达条件。克隆拟穴青蟹抗菌肽hyastatin基因成熟肽片段，与pET-28a表达载体连接后，转入到大肠杆菌BL21(DE3)中，通过优化条件进行诱导表达。结果显示，在异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)浓度0.2mmol/L、37℃条件下培养4h后表达量最大，分子大小与预期值相符。融合蛋白主要以包涵体形式高效表达，通过HisTrapHP柱子使其得到进一步纯化。Westernblot分析表明，该融合蛋白可与鼠抗His-tag单克隆抗体发生特异性结合。说明通过优化表达条件，获得拟穴青蟹抗菌肽hyastatin基因原核表达表达产物。
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