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ISSN: 2333-9721
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改良消减杂交技术用以筛选差异表达非编码小RNA的应用初探

, PP. 147-150

Keywords: 非编码小RNA,消减杂交,乳腺癌细胞

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Abstract:

旨在构建一种能快速、有效检测不同细胞中差异表达的非编码小RNA的方法。以乳腺癌细胞株MCF7和非癌乳腺上皮细胞HBL100为材料,用RNA分离试剂盒分离获得长度为18-100nt的RNA片段,3'端添加poly(A)尾后利用smart技术进行反转录,在反转录体系中加入生物素标记的dATP,得到单链cDNA;结合生物素-磁珠分离技术将cDNA与待测RNA进行消减杂交并以U6为内参验证消减结果;最后利用巢式PCR扩增杂交产物,PCR产物插入T载体后,挑取阳性克隆进行测序。结果显示,总RNA按不同大小片段分离富集后通过聚丙烯酰胺凝胶电泳,于100nt以下显示较亮条带;以U6为内参检测杂交效率,杂交后U6于33个循环时可见少量扩增条带;杂交产物经巢式PCR和电泳表明在100nt范围内有明显条带,得到差异表达的非编码小RNA。经过改良的消减杂交方法可以快速、有效的检测不同标本中差异表达的非编码小RNA。

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