%0 Journal Article
%T 改良消减杂交技术用以筛选差异表达非编码小RNA的应用初探
%A 王燕
%A 彭莉萍
%A 陈锦珍
%A 刘星
%A 罗镇明
%A 周天会
%J 生物技术通报
%P 147-150
%D 2013
%X 旨在构建一种能快速、有效检测不同细胞中差异表达的非编码小RNA的方法。以乳腺癌细胞株MCF7和非癌乳腺上皮细胞HBL100为材料，用RNA分离试剂盒分离获得长度为18-100nt的RNA片段，3'端添加poly（A）尾后利用smart技术进行反转录，在反转录体系中加入生物素标记的dATP，得到单链cDNA；结合生物素-磁珠分离技术将cDNA与待测RNA进行消减杂交并以U6为内参验证消减结果；最后利用巢式PCR扩增杂交产物，PCR产物插入T载体后，挑取阳性克隆进行测序。结果显示，总RNA按不同大小片段分离富集后通过聚丙烯酰胺凝胶电泳，于100nt以下显示较亮条带；以U6为内参检测杂交效率，杂交后U6于33个循环时可见少量扩增条带；杂交产物经巢式PCR和电泳表明在100nt范围内有明显条带，得到差异表达的非编码小RNA。经过改良的消减杂交方法可以快速、有效的检测不同标本中差异表达的非编码小RNA。
%K 非编码小RNA
%K 消减杂交
%K 乳腺癌细胞
%U http://biotech.caas.cn/CN/abstract/abstract9728.shtml