小麦h型硫氧还蛋白Trx-h酵母双杂交诱饵载体的构建和自激活检测

为构建小麦Trx-h型硫氧还蛋白酵母双杂交诱饵载体，并检测其对酵母细胞的自激活作用。利用RT-PCR扩增TaTrx-h基因的ORF区域，并与pGBKT7载体连接构建诱饵载体pGBKT7-Trx-h，利用PEG/LiAC法转化酵母AH109后，通过表型筛选检测诱饵蛋白对酵母有无自激活作用。结果表明，含pGBKT7-Trx-h质粒的酵母在SD/-Trp-Leu培养基上能正常生长，说明诱饵载体表达产物对酵母细胞无毒性作用；在SD/-Trp-Leu-His-Ade培养基上不能生长，说明诱饵质粒无自主激活报告基因的作用。因此，可以利用该诱饵载体通过酵母双杂交方法筛选与Trx-h蛋白相互作用的蛋白。