猪伪狂犬病毒野毒株SYBRGreenI实时荧光定量PCR诊断试剂盒的研制

根据GenBank中猪伪狂犬病毒（PRV）gE基因序列设计特异性的引物，PCR扩增获得PRVgE基因片段，构建重组质粒pMD–18T–gE，作为阳性标准品。对SYBRGreenI实时荧光定量PCR反应条件进行优化，建立猪PRVSYBRGreenI实时荧光定量PCR诊断方法，研制诊断试剂盒。扩增产物的熔解曲线分析结果显示只出现单特异峰，无引物二聚体，对猪圆环病毒（PCV–2）、猪细小病毒（PPV）、PRV（gE基因缺失株）、猪源E.coli、猪瘟病毒（CSFV）、猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒（PRRSV）均无阳性信号扩增，且重复性好，灵敏度可达2.3×10１拷贝/μL。结果表明，研制的PRV野毒株SYBRGreenI实时荧光定量PCR试剂盒特异灵敏、快速、重复性好，适于伪狂犬病毒临床样品的检测。