热球菌HJ21高温α-淀粉酶基因克隆、表达及性质研究

通过简并引物扩增热球菌(Thermococcussiculi)HJ21高温α-淀粉酶保守区域之间的序列,再利用Site-finding技术获得两端未知序列。构建了在N端添加了His6标签的表达载体pEt-28a-His6-THJA后转化E.coli,在IPTG诱导下表达。进一步纯化后SDS-PAGE电泳检测达到电泳纯,重组酶分子量为50KDa。重组酶最适作用温度和pH值分别为90℃,pH5.0。重组酶在pH为5.5时最稳定;K＋,Sr2＋,Mg2＋,Na＋对α-淀粉酶活力的促进作用不显著,Cu2＋,Pb2＋,Hg2＋,Zn2＋,N-溴代丁酰亚胺和三氯乙酸对该酶有显著抑制作用。