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华南农业大学学报 2007
大肠杆菌O157:H7eaeA基因的原核表达DOI: 10.7671/j.issn.1001-411X.2007.01.026, PP. 109-113 Keywords: 大肠杆菌O157:H7,eaeA基因,紧密素,原核表达,大肠杆菌,eaeA,基因蛋白,原核表达,Gene,Expression,Prokaryotic,反应原性,免疫原性,琼脂扩散试验,血清,多克隆,新西兰兔,纯化,表达蛋白,存在,包涵体,电泳,理论值,相对分子质量 Abstract: 将含广东分离株大肠杆菌O157:H7021210eaeA基因的克隆质粒双酶切后,亚克隆至原核表达载体pET-28a(),经PCR鉴定、酶切鉴定及核苷酸序列测定,正确构建了原核重组表达质粒pET-eaeA.再将该重组质粒转化E.coliBL21(DE3)pLysS,经IPTG诱导,进行SDS-PAGE,结果显示,目的蛋白的相对分子质量约为94000,与eaeA基因蛋白的理论值相符.破菌后电泳证实目的蛋白主要以包涵体形式存在.表达蛋白经初步纯化,3次免疫新西兰兔,获得抗eaeA蛋白的多克隆血清.经琼脂扩散试验和Western-blotting试验,表明该蛋白具有较好的免疫原性和反应原性.
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