农杆菌子房注射法对金钗石斛的活体转化研究

对金钗石斛Dendrobiumnobile进行人工自花授粉，在授粉之后10、20、30、40、45、50和60d分别将工程化根癌农杆菌AgrobacteriumtumefaciensEHA105(pCAMBIA1301)直接注射入子房内部.150d后，金钗石斛蒴果成熟，摘取果实，进行种子β-葡萄糖苷酸酶（GUS）染色、无菌播种、潮霉素筛选以及PCR检测试验.结果表明：子房注射对果实发育具有较大影响，在授粉后10~30d进行子房注射后，果实脱落；在授粉后45d进行子房注射，成熟果实注射部位的种子GUS染色率最高，可达18%；无菌播种之后，经潮霉素筛选，获得11株幼苗，每株植株均表现出GUS染色反应；随机挑选4株幼苗进行PCR检测，发现均能扩增出预期条带，说明外源基因已经整合到植株基因组内.农杆菌子房注射法在兰科植物转基因的成功应用，可以为兰科植物育种提供一种简单高效的方法.