牛白细胞介素-17真核表达载体的构建及在牛乳腺上皮细胞中的表达

【目的】在体外分离培养牛乳腺上皮原代细胞，并构建牛白细胞介素-17(bIL-17)基因真核表达质粒，观察重组质粒在牛乳腺上皮细胞的表达.【方法】提取牛脾脏细胞总RNA，通过RT-PCR扩增bIL-17，将bIL-17连入pMD19-T进行测序，测序成功后将bIL-17插入含有增强型绿色荧光蛋白报告基因的真核表达质粒pEGFP-N3上，构建真核表达质粒pEGFP-N3-bIL-17.用脂质体法将pEGFP-N3-bIL-17质粒转染于牛乳腺上皮细胞，荧光显微镜观察绿色荧光蛋白在细胞中的表达，RT-PCR检测bIL-17基因在细胞内的转录，定量ELISA检测bIL-17蛋白在细胞内的表达情况.【结果和结论】成功构建具有绿色荧光和新霉素抗性的双选择标记的牛白细胞介素-17真核表达载体，并可在牛乳腺上皮细胞成功表达.