OALib Journal期刊
ISSN: 2333-9721
费用：99美元

投递稿件

查看量	下载量

相关文章
更多...

华北农学报 2013

禽呼肠孤病毒σ3蛋白单克隆抗体的制备及特性鉴定

DOI: 10.3969/j.issn.1000-7091.2013.01.025, PP. 135-139

谢志勤,谢芝勋,刘加波,庞耀珊,邓显文,谢丽基,范晴

Keywords: 禽呼肠孤病毒,&sigma,3蛋白,单克隆抗体,制备,鉴定

Full-Text Cite this paper Add to My Lib

Abstract:

用体外表达的蛋白作为免疫原来制备特异的单克隆抗体,并对制备的抗体进行鉴定。将ARVσ3蛋白基因在体外扩增,扩增产物与载体PGEX-4T-1连接并在基因工程菌中表达,体外表达的蛋白经纯化后作为免疫原来制备特异的单克隆抗体和ELISA检测包被抗原,测定纯化后蛋白的浓度,按每鼠100μg的蛋白用量免疫BALB/c小鼠,免疫4次后取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0按5∶1进行融合。对融合后的杂交瘤细胞及时筛选,阳性孔经3次有限稀释法克隆,通过间接E-LISA方法测定其抗体效价,并通过WesteRnBlot、Dot-ELISA、直接免疫荧光、病毒中和等方法对获得的单抗特性进行检测。结果通过纯化的病毒含量为41.5mg/mL,应用纯化的病毒免疫BALB/c小鼠后与骨髓瘤细胞融合,通过克隆筛选成功获得1株能稳定传代并分泌抗禽呼肠孤病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株σ3B6-3K3,用其制备的腹水经间接E-LISA测定效价达105以上,并且与其他参试病毒株没有交叉反应,具有良好的特异性;病毒中和试验证明其中和能力低。应用ARVσ3蛋白制备并获得的杂交瘤细胞株σ3B6-3K3具有很好的特异性,不具有中和ARV的关键表位,可以用于ARV的特异性检测。

References

[1]	殷震，刘景华．动物病毒学[M]．第2 版．北京: 科学出版社， 1997: 544 - 548．
[2]	MeangeR J，WickRamasinghe R． Association between the pRotein of avian ReoviRus and viRus induced fusion of cell
[3]	[J]． ARchives of ViRology， 1999， 144: 193 - 197．
[4]	廖敏，谢芝勋，刘加波，等．鸡呼肠孤病毒分离与鉴定[J]．中国家禽， 2002， 24( 1) : 12 - 14．
[5]	谢芝勋，邓显文，刘加波，等．禽呼肠孤病毒广西分离株σ3 基因的克隆和表达[J]．中国预防兽医学报， 2005，3 : 167 - 170．
[6]	JaRi L，Pauliina N， Janita L， et al． ChaRacteRization of monoclonal antibodies against pRostate specific antigen pRoduced by genetic immunization [J]． J Immunol Methods， 2004， 289( 1) : 157 - 167．
[7]	杜秋明，鲁承，高建伟，等．鹅细小病毒单克隆抗体的制备与鉴定[J]．中国畜牧兽医， 2011， 38( 2) : 162 - 164．
[8]	滕蔓，罗俊，王秋霞，等．抗谷胱甘肽-S-转移酶 ( GST) 单克隆抗体的研制及初步应有[J]．华北农学报， 2011， 26( 4) : 82 - 85．
[9]	胡晓飞，魏凤仙，李青梅，等．植酸酶单克隆抗体的制备及鉴定[J]．华北农学报， 2012， 27( 5) : 44 - 48．
[10]	李晓军，张婷婷，孟凡依，等．抗Ⅰ型鸭肝炎病毒单克隆抗体的制备及其生物学特性鉴定[J]．中国预防兽医学报， 2011， 33( 6) : 487 - 489．
[11]	Dale R，PedRo K H． Kleven S． ChaRacteRistics and pathogenicity of two avian ReoviRuses isolated fRom chickens with leg pRoblems[J]． Avian Diseases， 1983， 27( 1) : 255 - 660．
[12]	Ni Y，Kemp M C． A compaRative study of avian ReoviRus pathogenicity: viRus SpRead and Replication and induction oR lesion [J]． Avian Disease， 1995， 39: 554 - 566．
[13]	Ni Y，Raming R F，Kemp M C． Identification of pRoteins encode by avian ReoviRases and evidence foR posl-tRouslational modification [J]． ViRology， 1993， 193: 466 - 469．

Full-Text

Contact Us

service@oalib.com

QQ:3279437679

WhatsApp +8615387084133