%0 Journal Article
%T 禽呼肠孤病毒σ3蛋白单克隆抗体的制备及特性鉴定
%A 谢志勤
%A 谢芝勋
%A 刘加波
%A 庞耀珊
%A 邓显文
%A 谢丽基
%A 范晴
%J 华北农学报
%P 135-139
%D 2013
%R 10.3969/j.issn.1000-7091.2013.01.025
%X 用体外表达的蛋白作为免疫原来制备特异的单克隆抗体,并对制备的抗体进行鉴定。将ARVσ3蛋白基因在体外扩增,扩增产物与载体PGEX-4T-1连接并在基因工程菌中表达,体外表达的蛋白经纯化后作为免疫原来制备特异的单克隆抗体和ELISA检测包被抗原,测定纯化后蛋白的浓度,按每鼠100μg的蛋白用量免疫BALB/c小鼠,免疫4次后取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0按5∶1进行融合。对融合后的杂交瘤细胞及时筛选,阳性孔经3次有限稀释法克隆,通过间接E-LISA方法测定其抗体效价,并通过WesteRnBlot、Dot-ELISA、直接免疫荧光、病毒中和等方法对获得的单抗特性进行检测。结果通过纯化的病毒含量为41.5mg/mL,应用纯化的病毒免疫BALB/c小鼠后与骨髓瘤细胞融合,通过克隆筛选成功获得1株能稳定传代并分泌抗禽呼肠孤病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株σ3B6-3K3,用其制备的腹水经间接E-LISA测定效价达105以上,并且与其他参试病毒株没有交叉反应,具有良好的特异性;病毒中和试验证明其中和能力低。应用ARVσ3蛋白制备并获得的杂交瘤细胞株σ3B6-3K3具有很好的特异性,不具有中和ARV的关键表位,可以用于ARV的特异性检测。
%K 禽呼肠孤病毒
%K &sigma
%K 3蛋白
%K 单克隆抗体
%K 制备
%K 鉴定
%U http://www.hbnxb.net/CN/abstract/abstract1440.shtml