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绿脓杆菌SYBRGreenI实时定量PCR检测方法的建立及初步应用
DOI: 10.7668/hbnxb.2014.03.012
Keywords: 绿脓杆菌 ,16SrDNA ,荧光定量PCR
Abstract:
为了建立绿脓杆菌的SYBRGreenI实时定量PCR检测方法，以便更加快捷、方便的检测绿脓杆菌，根据16SrDNA高度保守的特性，在绿脓杆菌16SrDNA保守区设计1对引物，利用普通PCR技术扩增出绿脓杆菌16SrDNA保守区277bp的片段，并克隆到pMD-18T载体上，纯化的质粒作为模板进行SYBRGreenⅠ荧光定量PCR扩增并制作标准曲线，建立了绿脓杆菌的荧光定量PCR检测方法。并对方法的灵敏性、特异性、重复性进行评价，又进一步在临床实践中进行检验。结果显示，所建立的方法对标准样品的最小检出浓度为28拷贝/μL。并且特异性检验结果显示与常见的菌群没有交叉反应，重复性良好。在临床中检测疑似绿脓杆菌感染病料55份，用所建立的荧光定量方法检测出阳性病料40份，而普通的PCR方法检测出阳性病料32份。表明建立的实时荧光定量PCR具有特异、敏感、快速、定量、重复性好等优点，可以在临床中用于绿脓杆菌的检测。
References
[1] 王 斌,李旭廷,黄 伟,等.急性临床型奶牛乳房炎病原菌的分离鉴定与药敏试验[J].中国奶牛,2012(5):37-39. [2] 韦志锋,李智红,陶 立,等.山羊支原体和绿脓杆菌混合感染的诊治[J].中国畜禽种业,2011,7(3):112-113. [3] 李翠蓉.初生雏鸭绿脓杆菌感染[J].中国畜牧兽医,2010，37(12):221-223. [4] 靳双星,陈理盾,段继永.雏鸡绿脓杆菌的分离鉴定及药敏试验[J].中国畜牧兽医,2011,38(7):230-232. [5] 陈红梅,程龙飞,万春和,等.死亡番鸭胚中绿脓杆菌的分离鉴定及药敏试验[J].中国兽医杂志,2012,48(12):40-42. [6] 吴异健.乳鸽绿脓杆菌病的诊疗报告[J].福建畜牧兽医,2010，32(1):57-58. [7] 杨培培,王 颖,胡继明,等.水貂铜绿假单胞菌鞭毛分型及分离株 flic 基因的克隆与序列分析[J].中国预防兽医学报,2012,34(9):749-751. [8] 鲍国连,佟承刚,韦 强,等.家兔绿脓杆菌病原特性和致病作用的研究[J].中国养兔,2001(5):3-4. [9] 蔡双福,周芳梅,黄楚妮.水样中绿脓杆菌产色素的初步研究[J].现代食品科技,2011,27(6):640-642. [10] 吴晨璐,施春雷,周 敏,等.食源性肠球菌荧光定量PCR检测方法的建立与评价[J].食品与生物技术学报,2011,30(5):779-787. [11] Shin S W,Cha S B,Lee W J,et al.Application of SYBR Green real-time PCR assay for the specific detection of Salmonella spp[J].Korean Journal of Veterinary Research,2013,53(1):25-28. [12] 李明凤,魏战勇,王学斌,等.猪细小病毒SYBR Green Ⅰ实时定量PCR检测方法的建立[J].浙江农业学报,2009,21(3):220-224. [13] 胡兴娟,王淑娜,周向阳,等.水产品中的副溶血弧菌和霍乱弧菌双重荧光定量PCR快速检测方法的建立[J].河南农业科学,2010(9):121-124. [14] 赵绪永,宁豫昌,赵 丽,等.多重实时定量PCR快速检测PRRSV、CSFV和PCV2混合感染方法的建立[J].河南农业科学,2013,42(2):123-127. [15] 李碧侠,赵 芳,任守文,等.猪 SIRT1 基因荧光定量PCR检测方法的建立[J].华北农学报,2011,26(增刊):44-46. [16] 张 莉,王英珍,鄢明华,等.羊流产衣原体的PCR检测方法研究[J].天津农业科学,2009,15(2):14-16. [17] 樊振华,王娟萍,孟 帆,等.猪细小病毒和猪圆环病毒2型多重PCR检测方法的建立与应用[J].山西农业科学,2012，40(10)：1102-1106. [18] 高 旭,鲁 承,杜秋明.鹅细小病毒SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用[J].河南农业科学,2010(12):121-124.
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