%0 Journal Article
%T 绿脓杆菌SYBRGreenI实时定量PCR检测方法的建立及初步应用
%A 宋月
%A 程琨
%A 梁秀丽
%A 王亚宾
%A 付彤
%A 韩立强
%A 魏战勇
%J 华北农学报
%P 59-63
%D 2014
%R 10.7668/hbnxb.2014.03.012
%X 为了建立绿脓杆菌的SYBRGreenI实时定量PCR检测方法，以便更加快捷、方便的检测绿脓杆菌，根据16SrDNA高度保守的特性，在绿脓杆菌16SrDNA保守区设计1对引物，利用普通PCR技术扩增出绿脓杆菌16SrDNA保守区277bp的片段，并克隆到pMD-18T载体上，纯化的质粒作为模板进行SYBRGreenⅠ荧光定量PCR扩增并制作标准曲线，建立了绿脓杆菌的荧光定量PCR检测方法。并对方法的灵敏性、特异性、重复性进行评价，又进一步在临床实践中进行检验。结果显示，所建立的方法对标准样品的最小检出浓度为28拷贝/μL。并且特异性检验结果显示与常见的菌群没有交叉反应，重复性良好。在临床中检测疑似绿脓杆菌感染病料55份，用所建立的荧光定量方法检测出阳性病料40份，而普通的PCR方法检测出阳性病料32份。表明建立的实时荧光定量PCR具有特异、敏感、快速、定量、重复性好等优点，可以在临床中用于绿脓杆菌的检测。
%K 绿脓杆菌
%K 16SrDNA
%K 荧光定量PCR
%U http://www.hbnxb.net/CN/abstract/abstract13.shtml