禽网状内皮组织增生病病毒囊膜蛋白基因的克隆及其原核表达

以本实验室保存的REV毒株为模板，采用RT-PCR技术扩增了REVenv部分基因，长为939bp，并进行亚克隆到pMD18-T质粒载体上，连接、转化、鉴定后得到阳性重组质粒pET-env，将目的片段进行序列分析，结果表明，该REV的env基因与已发表的SNV株、中国HA9901株以及A株同源性均达94%以上，推导的氨基酸同源性为94%以上。将该基因片段与原核表达载体pET-32a重组，并将重组质粒转化至宿主菌BL21中，用IPTG诱导表达，对表达的蛋白用SDS-PAGE电泳，免疫印迹和薄层凝胶扫描分析，表达产物与理论推理一致；免疫印迹结果证明，表达的env蛋白可被REV阳性血清所识别。