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正交设计优化大豆SSR-PCR反应体系及引物筛选
DOI: 10.7668/hbnxb.2009.02.021
Keywords: 大豆 ,SSR-PCR ,正交设计 ,体系优化 ,引物筛选
Abstract:
以大豆(GlycinemaxL.)为材料,研究了PCR反应体系的主要成分对大豆SSR扩增结果的影响,并确定影响SSR扩增结果的各因素的最佳用量.以CTAB法提取的大豆叶片DNA为模板,应用L16(44)正交设计对影响大豆SSR-PCR的主要参数进行优化,建立适合大豆SSR-PCR反应的最佳体系.结果表明:各因素不同水平浓度对PCR反应结果均有显著影响.大豆SSR-PCR优化反应体系为:2.0μL10×PCRBuffer,30ng模板DNA,150μmol/LdNTP,0.μmol/LSSR引物,1.5UTaqDNA聚合酶,2.0mmoL/LMg2+,加ddH2O至终体积20.0μL.优化的PCR扩增程序为:9℃预变性5min.9℃变性30s,50℃退火1min,72℃延伸1min,共35个循环,72℃延伸5min,℃保存.同时选用200对大豆引物对2份材料进行扩增,筛选出条带清晰,多态性好的引物7对,用于大豆SSR标记的进一步研究.
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