大鼠肾小管上皮细胞的分离鉴定及其增殖活力分析

目的：建立一种大鼠肾小管上皮细胞的分离鉴定方法，分析所获得细胞的增殖活力，为肾损伤等肾脏疾病的体外分析实验提供理论基础和技术支持。方法：采用Ⅱ型胶原酶消化法分离肾小管节段，并用Percoll密度梯度离心法进一步纯化肾小管，常规条件下对肾小管节段进行贴壁培养，待细胞爬出后，用免疫组织化学方法检测细胞角质素-18（CK-18）的表达情况，采用流式细胞术对第0、1和2（P0、P1、P2）代细胞的CK-18表达情况进行分析，用CCK-8方法检测各代细胞的增殖活力。结果：肾小管节段培养24h后，可见细胞从节段内爬出；培养72h后，细胞呈铺路石样密集生长。随着传代进行，P0、P1和P2代细胞CK-18的表达效率分别为95.9%、91.5%和76.8%，肾小管上皮细胞逐渐死亡，P2代细胞较P1代细胞增殖活力明显减弱(P<0.05)，同时培养体系中杂细胞增多。结论：该方法经济可靠、简便易行，但是所分离的肾小管上皮细胞只可在体外传代2次，不能长期培养，仅P0、P1代细胞可供体外分析实验使用。