电喷雾质谱法研究细胞色素Tb5及其F35Y突变体蛋白肽链和辅基的相互作用

本文通过牛肝线粒体细胞色素Tb5和它的F35Y突变体蛋白相对分子质量的外标法测定，得到细胞色素Tb5全蛋白的相对分子质量为10077.5脱辅基蛋白的相对分子质量为9461.4F35Y突变体蛋白的相对分子质量为10093.6，它的脱辅基蛋白的相对分子质量为9477.5，不同nozzle电压下的电喷雾质谱结果表明，该电压的大小明显影响蛋白肽链与血红素辅基之间的非共价结合，随着电压的降低，全蛋白谱峰的强度逐渐增大，然而，过低的电压导致了Na^+,K^+离子加合峰相对强度的增加，而不利于谱图分析。同时，考察到细胞色素Tb5在甲醇溶液和酸性溶液中的变性行为，因此选择nozzle电压70V,10%的甲醇水溶液和pH=7为得到全蛋白质谱峰的最佳条件。相同实验条件下得到的野生型CytTb5和F35Y突变体全蛋白的质谱峰相比较，其相对丰度有悬殊的差异，表明F35Y突变体蛋白的血红素结合能力明显低于野生型蛋白。通过解离出的Hemeb的分子离子峰进行解析，证明铁仍以三价离子存在于血红素辅基中。