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ISSN: 2333-9721
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海洋科学  2010 

一种适用于RT-PCR的微藻总RNA提取方法

, PP. 6-10

Keywords: 绿色巴夫藻(Pavlova,viridis),多糖,多酚,总RNA,反转录聚合酶链式反应

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Abstract:

以绿色巴夫藻(Pavlovaviridis)为实验材料,在比较了Trizol试剂法和异硫氰酸胍一步法这两种常用RNA提取方法的基础上,建立了一种十六烷基三乙基溴化铵(CTAB)和酸酚相结合的改良的CTAB-酸酚法。此方法利用高浓度的β巯基乙醇来防止RNA提取过程中多酚的氧化,然后利用CTAB并结合乙醇和醋酸钾同时使用的方法来有效去除多糖类物质对RNA的干扰。经琼脂糖凝胶电泳检测,所提取的总RNA的28S、18S条带清晰明亮,无降解;其A260nm/A280nm值为1.968;200~300nm全波长紫外扫描无多糖和蛋白吸收峰,表明提取的总RNA质量较好。对提取的总RNA直接进行反转录聚合酶链式反应(reversetranscriptionpolymerasechainreaction,RT-RCR),能够清楚地获得目的基因的cDNA片段,进一步证实了改良的CTAB-酸酚法是一种高质量提取微藻总RNA的有效方法。

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