富士苹果中膜结合态多酚氧化酶分离纯化方法

以烟台红富士为原料，研究膜结合态多酚氧化酶(mPPO)的分离纯化条件，采用非离子型去污剂结合热诱导方法粗提，硫酸铵分级沉淀，DEAE Sepharose Fast Flow离子交换柱层析方法对mPPO进行纯化，并对其进行串联质谱(LC—MS/MS)分析鉴定。结果表明mPPO提取纯化最佳条件为：超声提取10min，50%~80%饱和度硫酸铵沉淀，0.1mol/L NaCl 梯度洗脱。纯化后的mPPO纯度提高了64.30倍，比活力高达387032.97U/mg。纯化后的mPPO经SDS—PAGE和Native—PAGE分析均为单一蛋白带，且为亚基分子量67kDa的二聚体。经串联质谱分析及蛋白数据库鉴定此纯化蛋白为多酚氧化酶