F3重组毒素的克隆表达及纯化

以pEKH-F3质粒为模板，PCR扩增F3片段，将F3插入克隆质粒PQE80L，转化大肠杆菌，筛选，获得含有F3的PQE80L重组载体的克隆。提取绿脓杆菌菌株染色体DNA为模板，PCR扩增绿脓杆菌外毒素A催化区，PE40。然后将PQE80-F3和PE40重组，得到表达PQE80L-F3-PE40载体。转化至大肠杆菌DH5a,BL21，表达融合蛋白F3-PE40。结果显示，大肠杆菌表达了融合蛋白F3-PE40，表达的融合蛋白量大概占菌体总体蛋白量的20%。通过质粒提取、PCR扩增构建F3-PE40表达载体转化大肠杆菌，成功地表达了融合蛋白F3-PE40，为大规模表达、纯化F3-PE40的进一步功能奠定了基础。