偃麦草SRAP-PCR反应体系优化

以偃麦草叶片DNA为模板，利用单因子和L16(45)正交实验设计对影响偃麦草SRAP-PCR反应效果的Mg2+、引物、dNTPs、DNA、TaqDNA聚合酶5种因素进行优化，并比较了不同退火温度对扩增反应的影响，通过综合比较分析建立偃麦草SRAP-PCR的优化反应体系。结果表明优化的偃麦草SRAP-PCR总体系20μL中，Mg2+1.75mmol/L，引物0.15μmol/L，dNTPs0.20mmol/L，DNA50ng，TaqDNA聚合酶0.75U，2μL10×PCRbuffer；Mg2+和引物浓度对扩增效果影响最大，DNA浓度影响最小；采用该体系对32份偃麦草进行验证，扩增结果清晰稳定，此体系的建立为利用SRAP分子标记进行偃麦草遗传多样性、抗性标记等研究奠定了技术基础