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ISSN: 2333-9721
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分析化学  2015 

全血改进线性指数聚合酶链式反应用于焦磷酸测序检测基因多态性

DOI: 10.11895/j.issn.0253-3820.140395, PP. 55-62

Keywords: 全血直接扩增,线性指数聚合酶链式反应,焦磷酸测序,基因多态性,酒精代谢

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Abstract:

焦磷酸测序是目前基因多态性检测的主要方法之一,但是其前期的样本制备工作较为繁琐,限制了其在临床检测中的应用.为了简化焦磷酸测序的流程,本研究根据不对称PCR原理,改进了线性指数聚合酶链式反应(LATE-PCR)的引物设计方法,增加过量引物的长度和浓度,并结合全血直接扩增技术,建立了基于普通rTaq聚合酶和高pH缓冲液(HpHBuffer)的全血改进LATE-PCR(ImprovedLATE-PCR,imLATE-PCR)方法.考察了方法的最优扩增体系、血液抗凝剂对其影响以及全血模板量.采用单管、一步法直接扩增出单链测序模板,成功地对24例临床血样的乙醇脱氢酶基因多态性进行了检测,检测结果可用于指导临床个体化用药.24例样本的基因型分别为ADH1B位点AA纯合6例、AG杂合14例、GG纯合4例;ADH1C位点GG纯合20例、AG杂合4例、AA纯合0例.

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