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ISSN: 2333-9721
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米根霉胞内氨基酸的高效液相色谱测定及其代谢途径分析
DOI: 10.3724/SP.J.1096.2012.11048, PP. 574-578
Keywords: 高效液相色谱法,柱前衍生化,氨基酸,米根霉
Abstract:
建立了米根霉胞内代谢物提取方法定量评价体系,用100%甲醇作为提取剂获得对米根霉胞内能荷物质最佳的提取效果。用HPLC法建立了米根霉产富马酸体系胞内18种氨基酸的含量测定方法。采用异硫氰酸苯酯(PITC)作为柱前衍生化试剂,所有氨基酸在28min内洗脱完毕。以SepaxAA柱(250mm×4.6mm,5μm)为分析柱,流速1.0mL/min,检测波长254nm,以0.1mol/L醋酸钠(pH6.5)-乙腈(93∶7,V/V)为流动相A,乙腈-水(80∶20,V/V)为流动相B,梯度洗脱。18种氨基酸在1.87~45.3mg/L范围内线性关系良好,相关系数大于0.991;加标回收率在96.3%~102.7%之间;相对标准偏差在1.6%~2.9%之间。运用本方法测定不同发酵时间米根霉胞内氨基酸的含量,得到其在发酵过程中的变化趋势,并结合氨基酸代谢途径分析了该发酵条件下富马酸产量偏低的原因。
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